특허권

피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜(PPB)을 유효성분으로 함유하는 대사질환, 혈관계 질환, 또는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 조성물

상품번호 2019110823345836
IPC 한국(KO) 등록
출원번호 1020180044886
등록번호 1019369260000
출원인 가천대학교 산학협력단,제주대학교 산학협력단
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본 발명은 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜(PPB)을 유효성분으로 함유하는 대사질환, 혈관계 질환, 또는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 감태 유래 PPB는 세포단위의 실험과, 질환 유도 동물 모델 실험으로부터 항비만 효과, 혈관 내피 보호 효과, 및 혈액 응고 방지 효과를 확인한 바, 천연물 유래의 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜(PPB)을 유효성분으로 함유하는, 대사 질환 또는 혈관계 질환, 또는 혈전성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품 조성물이 제공될 수 있는 유용한 효과가 있다.

청구범위
청구항 1
하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로함유하는, 비만(obesity)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
[화학식 1]
청구항 2
삭제
청구항 3

하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로함유하는, 혈행개선에 의한 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
[화학식 1]
청구항 4
삭제
청구항 5
삭제
청구항 6
제3항에 있어서,상기 혈전성 질환은, 급성 심근 경색증, 허혈성 뇌졸중, 출혈성 뇌졸중, 심부정맥 혈전증, 하지 부종, 급성 말초 동맥 폐쇄증, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 급성 신장정맥 폐쇄증, 뇌 정맥동 혈전증, 협심증, 뇌경색는 중심 망막정맥 폐쇄인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
청구항 7
제3항에 있어서,상기 화학식 1로 표시되는 화합물은, 혈중 피브리노겐 함량 감소, 또는 혈중 플라스미노겐 활성인자 저해제-1형의 함량 감소의 효과로부터, 혈전성 질환을 예방 또는 치료하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
청구항 8
하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로함유하는, 비만(obesity)의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물:
[화학식 1]
청구항 9

하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로함유하는, 혈행 개선용 건강기능식품 조성물:
[화학식 1]
.
청구항 10
제1항에 있어서,상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 감태(Ecklonia cava) 추출물로부터 분리, 정제된 것을 특징으로 하는, 비만(obesity)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
청구항 11
삭제
청구항 12
삭제
발명의 설명
기 술 분 야
본 발명은 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜(PPB)을 유효성분으로 함유하는 [0001] 대사질환, 혈관계 질환, 또는혈전성 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
배 경 기 술
[0003] 국내를 포함한 전세계적으로 문제가 되고 있는 대사 증후군은 현대사회의 도시화된 생활환경, 과도한 영양섭취및 육체 활동 감소로부터 야기되며, 인슐린 저항성(Insulin resistance), 복부 비만, 혈압상승, 고중성지방혈증(Hypertriglyceridemia), 혈행 장애 등의 증상을 동반한다. 현재의 추세로는, 이러한 대사 증후군의 발생이 지속적으로 증가할 것으로 예상되며, 그 중에서도 아시아인의 당뇨병 발병률의 증가가 빨라지는 추세이다.
[0005] 많은 대사 증후군의 요인들 중에서도, 비만은 세계보건기구(WHO)에 의해서 1996년에 이미 질병으로 규정된 바있으며, 전세계적으로 약 1억 5천만명이 비만을 경험한 바 있다. 또한, 비만은 혈행 장애를 포함한 여러가지 대사질환과 직접적인 관련이 있음이 규명되어 있고, 비만으로 인하여 지출되는 의료비를 포함한 사회적 지출 비용도 기하급수적으로 증가할 것으로 예상되고 있다.
[0006] 비만으로 유발되는 혈행 장애는 콜레스테롤, 중성지방이 혈관에 쌓여 혈관이 좁아지거나, 혈액의 점도가 높아짐 따라 혈액순환이 원활하지 못하게 되며, 이러한 현상은 고혈압, 동맥경화, 뇌졸중, 심장병, 당뇨병 질환의발병과 병의 진행과도 밀접한 관련이 있다. 또한, 혈액순환의 장애는 손발 저림, 냉증, 만성두통, 어지럼증, 건망증, 기억력 감퇴 등의 증상을 수반하기도 한다.
[0007] 상기한 증상뿐만 아니라, 동맥경화, 뇌졸중 등과 같은, 혈행 장애로부터 발생하는 심혈관계 질환이 미국, 유럽,아시아 등 전세계적으로 주요 사망 원인이 되고 있는 실정이다.
[0008] 국내에서도 심혈관계질환이 사망원인 1위로 각종 조사 결과에서 보고되고 있다. 한국보건사회연구원의 보고에따르면 우리나라 국민의 뇌혈관질환 및 혈행 장애 등의 심혈관질환 발병율 및 그로 인한 사망율이 점차 증가하는 추세이며, 2001년에도 교통사고를 제외한 우리나라 사망율 원인의 1, 2위를 차지하고 있는 것으로 조사된 바다.
[0009] 심혈관계 질환을 유발하는 원인은 식습관, 생활방식, 유전적인 요인 등여러 가지가 보고되어 있는데 국민 생활수준의 증가 및 선진화가 진전될수록 혈행 장애 등의 발병률은 더 증가하는 경향을 나타낸다.
[0011] 한편, 혈소판은 골수(bone marrow)의 거핵세포(megakaryocyte)의 세포질이 떨어져서 혈액 중에 유리된 직경이 2-4 μm의 작은 세포로서 수명이 약 5-7일 정도로 짧은 세포이다. 혈소판은 혈관이 손상되면 활성화되어 손상부위에 응집됨으로써 지혈작용을 담당하는 세포이다. 혈관의 손상 시 혈관내벽의 콜라겐, 폰빌레브란트 인자(von Willebrand factor), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 노출되면서 혈소판의 부착을 촉진한다. 혈소판은 활성화되면서 세로토닌, Ca2+, 트롬복산(thromboxane) A2 등을 유리하여 주위의 다른 혈소판의 응집을 증폭시키고,혈장에 존재하는 응고인자(coagulation factor)와 반응하여 혈괴(clot)를 형성함으로써 지혈이 더 신속하고 효과적으로 일어날 수 있도록 한다.
[0012] 이러한 지혈 작용은 손상된 부위로부터의 혈액의 손실을 최소화 하고, 혈액의 정상적인 순환을 유지하기 위한방어기전이라 할 수 있다. 정상 혈관에서는 지혈 기전의 활성화 반응과 함께 억제 반응이나 혈괴 분해 반응들이균형을 이룸으로써 항상성을 유지하고 있다.
[0013] 그러나, 과도한 지혈작용 및 혈괴의 생성은 혈액의 흐름을 방해하며 혈행 이상을 초래하며 혈전(thrombus)과 같은 병변을 유발한다. 혈전이 생성되면 정맥에서는 혈액순환장애가 야기되어 부종이나 염증 등이 발생하고 동맥에서는 허혈이나 경색을 유발하여 심근경색증, 뇌졸중, 폐동맥 경색증 등의 질환을 초래하게 된다. 이와 더불어혈소판 활성화시 여러 가지 혈관조절 인자들(serotonin, TXA2, PAF, 등)이 유리되어 혈관을 수축시킬 수 있다.
혈관이 수축되면 혈류의 흐름을 막아 혈류 속도가 변화되어 혈소판 활성화가 증폭되며 혈관내피손상이 진행되어심혈관의 정상적인 기능이 저해된다. 이러한 혈행 이상이 동맥경화, 심근경색, 심장 허혈질환 및 뇌혈관질환과같은 혈관계질환 발병의 원인이 되는 것으로 알려져 있다.
현재 항혈소판 작용을 갖는 의약품들로 알려진 약물로는, 아스피린, 이미다졸, [0015] 인도메타신 등의 비스테로이드계화합물 등이 있으나, 이러한 약물은 모두 여러 부작용(인체에 지혈 과다 억제, 불임, 소화기 장애 등)을 야기할수 있는 바, 부작용 문제를 해소할 수 있는 방법의 일환으로, 천연물 유래의 자원으로부터 신규 약물을 개발하는 노력이 요구되고 있다.
[0017] 이에, 본 발명자들은 천연 유래의 자원으로부터 신규 약물을 개발하기 위해 노력하던 중, 감태 유래의 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜로부터 항비만 효과, 혈관 내피 보호 효과, 및 혈액 응고 방지 효과를 확인한 바,본 발명을 완성하였다.
선행기술문헌
특허문헌
[0019] (특허문헌 0001) 공개특허 10-2011-0126413
발명의 내용
해결하려는 과제
[0020] 본 발명의 목적은 대사 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
[0021] 본 발명의 다른 목적은 혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
[0022] 본 발명의 또 다른 목적은 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
[0023] 본 발명의 다른 목적은 대사 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
[0024] 본 발명의 또 다른 목적은 혈관계 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
[0025] 본 발명의 다른 목적은 혈전성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
[0026] 본 발명의 또 다른 목적은 상기 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물의 유효성분으로서 천연물 유래의 유효성분 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다.
과제의 해결 수단
[0028] 상기 목적을 달성하기 위하여,
[0029] 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[0030] [화학식 1]
[0031] .
[0033] 또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[0035] 나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 대사 질환의 예방 또는 치료용약학적 조성물을 제공한다.
[0037] 또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 혈관계 질환 또는 혈전성 질환의예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
[0039] 나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 대사 질환의 예방 또는 개선용건강기능식품 조성물을 제공한다.
[0041] 또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 혈관계 질환 또는 혈전성 질환의예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
발명의 효과
[0043] 본 발명에 따른 감태 유래 PPB는 세포단위의 실험과, 질환 유도 동물 모델 실험으로부터 항비만 효과, 혈관 내피 보호 효과, 및 혈액 응고 방지 효과를 확인한 바, 천연물 유래의 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜PPB)을 유효성분으로 함유하는, 대사 질환 또는 혈관계 질환, 또는 혈전성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품 조성물이 제공될 수 있는 유용한 효과가 있다.
[0044] 또한, 본 발명 감태 유래 PPB는 천연물 유래의 화합물인 바, 종래 합성 약물의 부작용 문제를 개선시킬 수 있는유용한 효과가 있다.
도면의 간단한 설명
[0046] 도 1은 감태 추출물의 에틸아세테이트(ethyl acetate) 분획물(ECE)의 HPLC 분석 결과이다.
도 2는 감태 추출물의 에틸아세테이트(ethyl acetate) 분획물(ECE)의 CPC 분석 결과이다.
도 3은 CPC를 이용하여 감태추출물의 에틸아세테이트 분획물(ECE)로부터 분리된 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜(PPB)의 HPLC 결과이다.
도 4는 단일물질로 추출한 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜(PPB)의 화학구조식이다.
도 5는 ob/ob 마우스(렙틴 결핍 마우스)의 비만 유도 동물 모델에서 감태추출물 (PPB) 투여에 의한 지방세포 크기의 변화 결과이다.
도 6은 ob/ob 마우스의 비만 유도 동물 모델에서 PPB 투여에 의한 간 조직의 지방 축적량의 변화 결과이다.
도 7은 ob/ob 마우스의 비만 유도 동물 모델에서 PPB 투여에 의한 혈중 세로토닌의 변화 결과이다.
도 8은 ob/ob 마우스의 비만 유도 동물 모델에서 PPB 투여에 의한 혈중 총 아질산염(total nitrite)의 변화 결
과이다.
도 9는 ob/ob 마우스의 비만 유도 동물 모델에서 PPB 투여에 의한 혈중 PAI-1의 변화 결과이다.
도 10은 혈관 내피세포에 팔미트산 처리를 통한 혈관 내피세포 사멸에 방지 효과에 관한 결과이다.
발명을 실시하기 위한 구체적인 내용
[0047] 이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
[0048] 이하의 설명은 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시로서 이해되어야 하며, 본 발명의 사상 또는 범주가 하기의 설명으로부터 제한되는 것은 아니다.
[0050] 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[0051] [화학식 1]
[0052] .
[0054] 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜(PPB)로 명명될 수 있다.
[0055] 본 발명의 일 측면에서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 감태에서 유래한 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6‘바이엑콜 (PPB) 단일물질이고, 이의 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 본 발명에 포함된다.
[0057] 본 발명은 상기 배경기술과 같은, 종래 합성 약품의 부작용 등의 문제 개선과 천연물 유래의 유효한 약물 개발요구에 의해 도출된 것으로 이해될 수 있고, 본 발명 감태 유래 PPB는, 천연물 유래의 화합물인 바, 상기 요구에 부합되는 유효성분이다.
[0059] 본 발명의 일 측면에서, 감태에서 유래한 본 발명의 PPB 화합물은 항비만 효과가 있음을 확인한 바, 대사 질환에 적용될 수 있음을 규명하였다.
[0061] 또한, 본 발명의 다른 측면에서, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물이 혈액 응고를 방지할 수 있음을 확인하였고, 또한, 혈액 내 염증관련 수치가 감소됨을 확인하였고, 나아가, 섬유소 용해 관련 인자가 개선되었음을확인한 바,
[0062] 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물이 항혈전 효과가 있고, 이에, 혈전성 질환에 적용될 수 있음을 규명하였다.
[0064] 나아가, 본 발명의 또 다른 구체예에서는, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물이 혈관 내피 세포를 보호할수 있음을 확인하였고, 혈관 수축 인자를 저해하여, 혈관 이완 작용이 있음을 확인한 바, 혈관계 질환에 적용될수 있음을 규명하였다.
따라서, 감태에서 유래한 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물인, 피로갈롤-[0066] 플로로글루시놀-6,6‘바이엑콜(PPB)은 항비만, 항혈전, 및 혈관 보호 효과로부터, 대사질환, 혈관계 질환, 또는 혈전성 질환에 적용될 수 있다.
[0068] 본 발명의 일 구체예에서,
[0069] Ob/Ob 마우스 비만 유도 실험동물에서 PPB처리군에서의 항비만 효과는 지방 조직의 세포 크기를 줄이고, 간 조직에 축적되는 지방의 양을 감소시켰다. 이를 통해 몸무게의 감소를 줄여주어 비만이 개선됨을 확인하였다.
[0071] 본 발명의 다른 구체예에서,
[0072] Ob/Ob 마우스 비만 유도 실험동물에서, 혈관내벽의 내피세포의 손상을 막고 혈관바깥벽의 섬유소 생성을 줄이며혈관 내장 근육층의 비정상적인 증식을 막고, 혈관의 탄력성 저하를 개선시킨 것을 확인한 바, 혈관계 질환의예방, 개선, 또는 치료의 효과가 있음을 확인하였다.
[0074] 본 발명의 다른 측면에서,
[0075] 본 발명 화학식 1로 표시되는 화합물은 감태 유래인 것이나, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어서,감태가 아닌 여타의 천연물 유래, 또는 합성에 의하여 제조되는 화학식 1로 표시되는 화합물을 배제하는 것이아니고, 이 역시 본 발명에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
[0076] 본 발명의 일 구체예에서,
[0077] 다만, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 바람직하게 감태 유래이고, 보다 바람직하게 감태 추출물 유래, 또는이의 분획물의 유래인 것으로 이해될 수 있다.
[0078] 한편, 감태(Ecklonia cava)는 갈조류로 갈조식물 다시마목 미역과의 여러살이 해조를 말하며, 우리나라에는 주로 제주연안 수심 10 m 내외에서 서식하고 일본에서도 서식하는 것으로 알려져있고 길이는 1~2 m이며 줄기는 원기둥 모양이고 밑동은 뿌리 모양을 하고 있는 것일 수 있다.
[0080] 나아가, 본 발명의 다른 측면에서,
[0081] 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 감태, 감태 추출물, 또는 이의 분획물로부터 얻어지는 것일 수 있다.
[0083] 본 발명의 일 구체예에서,
[0084] 상기 화학식 1로 표시되는 화합물이 함유되는 감태 추출물은, 통상적으로 알려진 식물 추출물의 추출방법을 제한 없이 사용하여 제조될 수 있다.
[0085] 상기 감태 추출물은 다음과 같이 제조될 수 있다. 감태 추출물은 감태(Ecklonia cava) 식물의 전체, 또는 적어도 일부를 추출 매질, 예를 들어, 기체상 또는 액체상의 무기물 또는 유기물, 또는 이의 혼합물을 사용하여, 추출할 수 있고, 이에 제한되지는 않으나, 구체예의 하나로, 통상적인 추출용매를 이용하여 얻을 수 있으며, 예를들어 (a) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (b) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (c) 아세톤, (d) 에틸 아세테이트,(e) 클로로포름, (f) 1,3-부틸렌글리콜, (g) 헥산, (h) 디에틸에테르, (i) 부틸아세테이트 또는 (j) 물을 추출용매로 하여 얻을 수 있다. 또 다르게는 상기 감태 추출물은 감태 식물의 초임계 추출물일 수 있고, 예를 들어,감태의 CO2 초임계 추출물일 수 있다.
[0087] 본 발명의 다른 측면에서, 상기 감태 추출물은 추가적으로 분리 정제된, 분획물, 또는 분획물질일 수 있다.
[0088] 여기서, 상기 분획물 또는 분획물질은 본 발명이 실험하여 보이는 실험예와 같이 대사 질환, 혈관계 질환, 또는혈전성 질환의 예방, 개선 또는 치료의 용도로 사용할 수 있는, 바람직하게 상기 화학식 1로 표시되는 화합물이적어도 일부 함유되는 분획물, 또는 분획물질을 말한다.
[0089] 본 발명의 일 구체예에서, 상기 분획물, 또는 이의 분획물질은 본 발명 하기 실험예에서 보이는 효과와 같이,혈중 피브리노겐 함량 감소, 혈중 플라스미노겐 활성인자 저해제-1형의 함량 감소, 프로스타글란딘 (PGI2) 발현증가, 세포내 부착 단백질(E-selectin, ICAM-1, VCAM-1, vWF) 발현 감소 및 ET-1(endothelin-1) 발현 감소로이루어진 군으로부터 선택되는 1가지 이상의 효과로부터, 혈전 생성 억제, 혈관 탄력성 보존 및 개선, 혈관 내장근육 비정삭적 증식 억제, 혈관내벽 내피세포 손상 억제, 혈관외벽 섬유소 생성 억제, 혈압 증가 방지의 효과중 1종 이상의 효과를 나타내는 것으로부터, 대사 질환, 혈관계 질환, 혈전성 질환을 예방, 개선 또는 치료할수 있는 바, 본원에 설명되는 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 감태 추출물과 사실상 동일한 기능이 수행 가능한 물질로, 다만, 상술된 감태 추출물로부터 유효성분을 함유하는 것으로 보다 분리 정제된것을 의미한다.
한편, 상기 분획물, 또는 분획물질은 보다 단리/정제된 형태(form)를 의미할 [0090] 수도 있다. 예컨대, 감태 식물 추물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 감태 식물의 분획물 또는 분획물질에 포함되는 것이다.
[0092] 본 발명의 다른 측면에서,
[0093] 감태(Ecklonia cava) 식물의 전체 또는 적어도 일부를, 용매에 침지시키는 단계; 및

[0094] 상기 용매로부터 감태 추출물을 수득하는 단계; 및
[0095] 상기 감태 추출물로부터 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물을 분리, 정제하는 단계;를 포함하는 상기 화학식1로 표시되는 화합물의 제조방법이 제공된다.
[0097] 여기서, 상기 용매는, 본 발명 화학식 1로 표시되는 화합물이 적어도 일부 녹아 추출될 수 있는 것이라면 제한없이 사용할 수 있고, 예를 들어 통상적인 추출 용매를 사용할 수 있으나, 통상 약학적 조성물, 또는 건강기능식품 조성물에 적합한 추출 용매를 사용하는 것이 바람직할 수 있다.
[0099] 본 발명의 일 구체예에서,
[0100] 상기 용매는, 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 1,3-부틸렌글리콜, 헥산, 디에틸에테르, 및 부틸아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 용매, 또는 2종 이상의 혼합용매인 것을 사용할 수 있다.
[0102] 본 발명의 다른 구체예에서,
[0103] 상기 용매는, 물, C1-2 저급알코올, 또는 이의 혼합물을 사용할 수 있다.
[0105] 본 발명의 다른 측면에서,
[0106] 상기 화학식 1로 표시된는 화합물의 제조방법은,
[0107] 상기 감태 추출물을 물, C1-4 알코올, 염화 메틸렌, 클로로포름, 에틸 아세테이트, 헥산, 부탄올 또는 이들의 혼합용매를 더 사용하여 분획하는 단계;를 더 포함할 수 있다.
[0109] 여기서, 상기 추출 원료의 준비 단계는, 감태 식물의 잎, 줄기, 뿌리 또는 식물 전체, 또는 적어도 이의 일부를절단하여 준비하거나, 추가적으로 이를 분쇄하여 준비할 수 있고, 상기 혼합 단계는 추출 매질에 상기 준비된추출 원료의 적어도 일부가 혼합되게 하되, 상기 추출 매질은 본원에 제시되는 모든 종류의 기체성, 또는 액체성의 무기물 또는 유기물, 및 이의 혼합물 중 1종 이상을 말하며, 일 구체예로, 용매를 사용할 수 있고, 예를들어, (a) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올,이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (b) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (c) 아세톤, (d) 에틸 아세테이, (e) 클로로포름, (f) 1,3-부틸렌글리콜, (g) 헥산, (h) 디에틸에테르, (i) 부틸아세테이트 또는 (j) 물을추출용매로 할 수 있다.
[0110] 한편, 상기 유용성분의 추출 단계는, 일반적으로 추출 매질에 함유되어 나오는 성분을 말하나, 오히려 추출 매질이 아닌 잔여물에 유용성분이 남아있을 수 있는 방법으로 제시되는 것을 제한하는 것은 아니고, 보다 일 구체예로는, 통상적인 여과 분리방법, 예를 들어 고체 성분과 액체 성분을 분리, 또는 여과하는데 사용되는 통상적인 모든 방법을 제한 없이 사용할 수 있고, 예를 들어, 여과(filter) 장치를 사용하여 여액과 잔류물로 분리시킬 수 있다. 또한, 여기서 여과는 1차, 2차, 또는 그 이상의 차수로 반복하여 추출되는 여과 단계일 수 있고,잔류물로부터 바람직하게 여액으로 되도록 많은 유용성분이 추출될 수 있는 방법이라면, 제한 없이 사용될 수있다.
[0111] 다른 한편, 상기 여액은 이 자체로 감태 추출물일 수 있으나, 또 다르게는 이를 농축, 동결건조 시키는 단계를더 수행하여, 추출물, 또는 분말의 형태로 수득할 수 있고, 이를 다시 목적하는 사용 용도에 따라, 별도의 용매 다시 용해, 또는 현탁시켜 사용할 수 있다.
예를 들어, 유용성분을 보다 농도 높게 수득하기 위하여, 본원에 설명되는 [0112] 분획물, 또는 분획물질의 제조방법또는 통상적인 분획물, 또는 분획물질의 제조방법을 제한 없이 사용할 수 있다.
[0114] 본 발명의 일 구체예에서는, 감태 식물을 주정 추출하였고, 예를 들어 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40%이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상의 주정으로 추출할 수 있고, 보다 구체예로, 50% 주정을 추출용매로 사용할 수 있다.
[0116] 본 발명의 또 다른 구체예에서는, 각 조건을 상이하게 추출 용매를 설정하여 감태 추출물을 제조한 결과, 40%내지 100% 에탄올, 40% 내지 90% 에탄올, 40% 내지 80% 에탄올, 40% 내지 70% 에탄올, 40% 내지 60% 에탄올,40% 내지 50% 에탄올, 또는 50% 내지 100% 에탄올, 50% 내지 90% 에탄올, 50% 내지 80% 에탄올, 50% 내지 70%에탄올, 50% 내지 60% 에탄올, 또는 30% 내지 60% 에탄올, 35% 내지 65% 에탄올, 또는 40% 내지 60% 에탄올,또는 50% 에탄올을 사용하여 추출하는 것이 바람직함을 실험적으로 입증한 바 있고, 본 발명은 이를 포함한다.
[0117] 나아가, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 감태 추출물의 제조방법을 대량생산, 또는 산업적 이용 가능성을 향상시키기 위한 방법으로, 바람직하게 30% 내지 60% 에탄올, 35% 내지 65%에탄올, 또는 40% 내지 60% 에탄올, 또는 50% 에탄올을 사용할 수 있고, 특히 50% 에탄올을 사용하여 감태 추출물을 제조하는 것이 유용할 수 있다.
[0119] 한편, 본 발명 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법은 추출되는 시료(감태 식물, 또는 이의 적어도 일부, 또는 이의 분쇄물, 분말 등)에 상기 추출 용매를, 상기 시료 무게의 2배, 5배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50이상으로 첨가하여 추출할 수 있다.
[0120] 한편, 본 발명의 추출방법의 추출 시간, 추출시 온도, 등의 통상적으로 기술자가 용이하게 변경하여 적용할 수있는 부분은 제한 없이 본 발명에 포함되는 것으로 이해되어야 하고, 이는 본 발명에 포함된다.
[0121] 예를 들어, 본 발명의 일 구체예에서는, 0 내지 40℃, 10 내지 40℃, 20 내지 40℃, 30 내지 40℃, 20 내지 30℃, 또는 상온 추출할 수 있고, 한편, 추출 시간은 역시 제한이 없으나, 예를 들어, 10분, 20분, 30분, 40분, 1시간, 2시간, 5시간, 10시간 이상으로 할 수 있다. 또한, 상기 추출시에는 상기 추출 매질과 추출 원료를 충분하게 혼합시킬 수 있고, 예를 들어 교반 추출할 수 있으며, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물이 가장 바람직하게 추출 매질, 추출 용매에 함유되어 추출될 수 있는 것이라면, 제한 없이 본 발명의 추출물의 제조방법에 용이하게 적용시킬 수 있는 바, 본 발명은 이를 모두 포함한다.
[0123] 나아가, 본 발명의 다른 측면에서,
[0124] 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로함유하는, 대사 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.
[0126] 본 발명의 일 구체예에있어서,
[0127] 비만 유도 마우스 모델에서 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 사용하여, 지방세포 감소와 간에서의 지방 축적이 현저히 감소됨을 확인한 바, 이러한 항비만 효과로부터, 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 대사 질환의 예방, 개선, 또는 치료의 효과를 나타내는 유효성분으로 제공될 수 있다.
[0129] 본 발명의 다른 구체예에서,
[0130] 상기 대사 질환은 대사성 질환(metabolic diseases)으로 분류되는 질환을 모두 포함하고, 이에 제한되지는 않으나, 대사증후군, 내장지방증후군, 과식, 과음과 운동부족에 의한 과영양에 의한 대사 질환, 유전인자에 의한 대사 질환, 노화요인에 의한 대사 질환, 중성지방 과잉 축적으로 이한 대사 질환, 인슐린 저항성, 고혈당, 리포백질 이상, 고혈압, 심혈관 질환, 동맥경화, 심근경색, 또는 이의 상태를 야기하는 대사 질환, 예를 들어 비만, 등을 포함한다.
[0132] 본 발명의 또 다른 구체예에서,
[0133] 상기 대사 질환은, 본 발명 화학식 1로 표시되는 화합물로부터 예방, 개선, 호전, 또는 치료의 효과가 나타날수 있는 질환이라면, 모두 포함되고, 보다 바람직하게, 상기 대사 질환은 비만(obesity), 당뇨병(diabetes), 고혈압(hypertension), 또는 심장혈관 질환(cardiovascular disease)일 수 있다.
[0135] 또한, 본 발명의 또 다른 측면에서,화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 [0136] 허용가능한 염을 유효성분으로함유하는, 혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.
[0138] 본 발명의 일 구체예에서,
[0139] 상기 혈관계 질환은, 구체적으로, 본 발명 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 함유 ECE 분획물은 하기 실험예 및본원에 참조되는 도면에서 보이는 바와 같이, 혈중 피브리노겐 함량 감소, 혈중 플라스미노겐 활성인자 저해제-1형의 함량 감소, 프로스타글란딘 (PGI2) 발현 증가, 세포내 부착 단백질(E-selectin, ICAM-1, VCAM-1, vWF)발현 감소 및 ET-1(endothelin-1) 발현 감소의 효과로부터 예방, 개선, 호전, 또는 치료의 효과가 나타날 수 있는 혈관계 질환인 것으로 이해될 수 있다.
[0141] 본 발명의 다른 구체예에서,
[0142] 상기 혈관계 질환은, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물이 혈전 생성 억제, 혈관 탄력성 보존 및개선, 혈관 내장근육 비정삭적 증식 억제, 혈관내벽 내피세포 손상 억제, 혈관외벽 섬유소 생성 억제, 혈압 증 방지의 효과가 나타날 수 있는 혈관계 질환인 것으로 이해될 수 있다.
[0144] 본 발명의 또 다른 구체예에서,
[0145] 상기 혈관계 질환은, 혈관 평활근세포 이상 증식 질환, 이동성 또는 혈관내막 증식 질환, 혈관염증질환, 혈관재착증, 혈관협착증, 동맥경화증, 아테롬성 동맥경화증, 심부전증, 심근경색증, 협심증, 부정맥증, 고혈압, 고혈압성 심장질환증, 선천성 심장질환증, 뇌졸중 또는 말초혈관협착증의 질환 또는 증상이다.
[0147] 나아가, 본 발명의 다른 측면에서,
[0148] 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로함유하는, 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.
[0150] 본 발명의 일 구체예에서,
[0151] 상기 혈전성 질환은, 혈행 중의 혈전 발생으로 야기되는 질환인 것으로 이해될 수 있다. 본 발명의 화학식 1로표시되는 화합물은 혈전의 생성을 억제하거나, 혈액 응고 방지, 혈소판 응집 방지 또는 생성된 혈전의 용해시킬수 있는 효과를 나타내는 것으로 이해될 수 있고, 이에, 혈전성 질환의 예방, 개선, 또는 치료의 효과를 나타낼수 있다.
[0153] 본 발명의 다른 구체예에서,
[0154] 상기 혈전성 질환은, 급성 심근 경색증, 허혈성 뇌졸중, 출혈성 뇌졸중, 심부정맥 혈전증, 하지 부종, 급성 말초 동맥 폐쇄증, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 급성 신장정맥 폐쇄증, 뇌 정맥동 혈전증, 협심증, 뇌경색또는 중심 망막정맥 폐쇄이다.
[0156] 한편, 상술된 본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 상기 약학적 조물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다.
[0158] 경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴,메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘 등과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염 등과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.
[0160] 본 발명의 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의하였다.
[0161] 이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
상기 제제화의 예시는 통상적인 제제예에 관한 것일 뿐, 본 발명의 제제화가 [0163] 이에 제한되지는 않음을 통상의 기술지식을 가진 자라면 용이하게 이해할 수 있다.
[0164] 나아가, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 또는 상기 약학적 조성물의 인체에 대한 투여량은 대상의나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70Kg인 성인 대상를기준으로 할 때, 일반적으로 0.1-1000 mg/일이며, 바람직하게는 1-500 mg/일이며, 또한 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
[0166] 상술된 질환 또는 증상에서 본 발명 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 즉 피로갈롤-플로로글루시놀-6,6'바이엑콜(PPB)의 유용함은, 본원에 개시된 실험예 및 도면에 의해 뒷받침 된다.
[0168] 나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이를 함유하는 감태 추출물, 또는 이의 분획물, 또는 ECE분획물을 치료학적으로 유효한 양으로 대상(subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 대사 질환, 혈관계 질환,또는 혈전성 질환의 치료 방법을 제공한다.
[0169] 여기서, 상기 대사 질환, 혈관계 질환, 또는 혈전성 질환은, 본원에서 설명된 바와 같다.
[0171] 이때, 상기 치료학적 유효량은 투여 방법에 따라, 체내로 투여시 대상(subject)의 증상 또는 상태를 개선,치료, 예방 또는 호전시킬 수 있을 정도의 양을 말한다. 또한 상기 양은 투여하는 대상의 체중, 나이, 성별, 상태, 가족력에 따라 상이할 수 있고, 본 발명에서 상기 치료 방법은 이처럼 대상별로 상이한 조건에 따라 다른양의 투여량을 정할 수 있다.
[0172] 상기 "유효한 양"은, 예를 들어 질환을 치료하는데 유효한 양이다.
[0174] 본 발명의 방법에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이를 함유하는 감태 추출물, 또는 이의 분획물, 또는ECE 분획물 또는 약학적 조성물은 질환을 치료하는데 유효한 임의의 양 및 임의의 투여 경로를 사용하여 투여될수 있다. 필요한 정확한 양은 대상(subject)의 종, 연령, 및 일반적인 병태, 감염의 중증도, 특정한 제제, 그것의 투여 방식, 등에 따라 대상별로 변할 것이다. 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이를 함유하는감태 추출물, 또는 이의 분획물, 또는 ECE 분획물 또는 약학적 조성물은 복용량의 투여 용이성 및 균일성에 대해 투약량 단위 형태로 빈번하게 제형화된다. 표현 "투약량 단위 형태"는, 본 명세서에서 사용된 바와 같이 치료될 대상에 적절한 제제의 물리적으로 별개의 단위를 의미한다. 또한, 본 발명의 조성물의 총 일일 사용량이건전한 의료 판단의 범위 내에 주치의에 의해 결정될 것으로 이해될 것이다. 임의의 특정한 대상 또는 유기체에대한 특정 유효한 투여 수준은 하기를 포함하는 다양한 인자에 의존된다: 치료될 질환 및 질환의 중증도; 이용된 특정 유효성분의 활성; 특정 조성물 이용된; 연령, 체중, 일반적인 건강, 대상의 성별 및 다이어트; 투여 시간, 투여 경로, 및 이용된 특정 유효성분의 배출 속도; 치료의 지속시간; 이용된 특정 유효성분 단독 또는 공동투여된 약물, 및 의료 기술에서 잘 알려진 이 외의 요인.
[0176] 용어 "대상(subject)"은, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 동물, 예를 들면 포유동물, 예컨대 인간을의미한다.
[0178] 또한, 본 발명의 일 측면에서,
[0179] 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이를 함유하는 감태 추출물, 또는 이의 분획물, 또는 ECE 분획물을 유효성분으로 함유하는 대사 질환, 혈관계 질환, 또는 혈전성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물이 제공된다.
[0180] 본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이를 함유하는 감태 추출물, 또는 이의분획물, 또는 ECE 분획물은, 이를 유효성분으로 함유하는 식품 조성물로 제공될 수 있다.
[0181] 여기서, 상기 식품 조성물은 유효성분 외에, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어,단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함할 수 있다.
[0182] 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 [0183] 본 발명의 상기 화학식 1로표시되는 화합물, 이를 함유하는 감태 추출물, 또는 이의 분획물, 또는 ECE 분획물 이외에 구연산, 액상과당,설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
[0185] 이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의하여 상세히 설명한다.
[0186] 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
[0188] <실시예 1> 감태 추출물로부터 PPB의 분리
[0189] 감태로부터 본 발명 화학식 1로 표시되는 화합물, 피로갈로-플로로그루시놀-6,6'-바이엑콜(PPB)을 분리 동정하기 위하여, 다음과 같이 실시하였다.
[0191] <1-1> 감태 추출물의 제조
[0192] 아쿠아 그린텍(Jeju, Korea)에서 제공 받은 감태 분말을 추출물 제조에 사용하였다. 분말 형태의 감태 100g을4L 용량의 50% 에탄올에 넣고, 24시간 동안 상온(20℃)에서 추출한 후, 원심분리 하여 상층액을 와트만 필터 종이(Whatman No.4)를 사용하여 여과하였다. 여과된 추출물을 감압농축하여 에탄올을 제거 후, 동결건조하고, 분화하여 분말 형태의 감태 추출물을 제조하였고, 이를 4℃에서 보관하였다.
[0194] <1-2> 감태 추출물의 유기용매 분획물의 제조
[0195] 상기 <1-1>에서 제조한, 동결건조된 감태 추출물을 증류수에 녹인 후, 비극성에서 극성으로 유기용매를 순차적으로, 핵산(n-hexane), 클로로포름, 에틸아세테이트를 가하여 용매 분획하여 얻어진 생성물을 감압농축하여 분획물을 제조하였고, 이를 사용 전까지 4℃에서 보관하였다.
[0197] <1-3> 감태 유래 분획물의 HPLC 분석
[0198] 감태 추출물 에틸아세테이트 분획물(ECE)을 HPLC 분석을 통하여, PPB의 성분을 확인하였다.
[0199] HPLC 분석은 구배 아세토니트릴-물(Gradient acetonitrile-water) 용매 시스템을 사용하여 선파이어 C18 컬럼(3.5μm 4.6 X 250)에 5 mg/mL의 ECE 시료를 주입하였다. 이동상은 아세토니트릴-물로 다음과 같은 비율에 변화를 주었다. 아세토니트릴과 물을 0 → 10분 (10:90 → 25:75 v/v), 10 → 40분(25:75 → 35:65 v/v), 40 → 50분(35:65 → 100:0 v/v), 50 → 60분(100:0 → 100:0 v/v)으로 흘려주었고, 유속은 1 mL/min이었으며, UV 흡광도 254nm에서 측정하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
[0201] <1-4> 원심 향류분배 크로마토그래피(CPC)를 사용한 PPB의 분리
[0202] CPC(Centrifugal Partition Chromatography)를 사용하여 감태 추출물 에틸아세테이트 분획물(ECE)로부터 순도80~90%의 PPB 단일 화합물로 분리 하였다. CPC 분리를 위해 서로 섞이지 않는 2-상 용매시스템을 사용하였다.
사용된 용매는 n-헥산:에틸아세테이트:메탄올:물을 2:8:3:7 비율로 분별깔때기에 혼합하였으며(4L), 분별깔때기안의 혼합물이 안정화를 이룬 후, 분리를 실시하였으며, 상층의 용매는 고정상으로, 하층의 용매는 이동상으로사용하였다.
[0203] 분리를 위해 CPC column에 고정상 용매를 가득 채운 후, CPC 로터를 1,000rpm으로 회전하는 상태에서 이동상 용매를 하강 모드(descending mode)로 2 mL/min 유속으로 컬럼에 흘려주었으며, 이동상 용매가 컬럼을 통해 유체적 안정화가(배압; 3.3 MPa) 이루어질 때까지 흘려주었다.
[0204] 시료는 ECE(500mg)를 고정상과 이동상 용매 각 3 mL씩(6 mL) 1:1 비율로 혼합된 용매에 녹인 후, 주입 벨브를통해 주입하였다. CPC 컬럼에서 배출되어 나온 분획물은 290 nm 파장의 UV로 분석하였으며, 분획물은 6 mL씩 분별 수집기(fraction collector)에 의해 8 mL 유리 시험관에 수집하였고, 그 결과를 도 2에 나타내었다.
[0206] <1-5> CPC 분리물(fraction)의 HPLC 분석
[0207] 상기 <1-4>의 CPC로부터 분리된 분리물(fraction)을 상기 <1-3>의 동일한 분석 조건으로 HPLC 분석을 통하여90% 이상의 순도로 분리된 PPB를 확인하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었고, 분리된 PPB의 화학 구조는 도4에나타내었다.
[0209] <실시예 2> PPB의 항비만 효과 평가
[0210] 본 발명에서 분리 동정한 PPB의 항비만 효과를 평가하기 위하여, 다음과 같이 실험하였다.
<2-1> Ob/Ob 마우스 [0212] 비만 유도 실험동물의 제작 및 처리
[0213] 6주령된 수컷 ob/ob 마우스를 선정하여 6주간 일반 식이의 섭취에 의해 유발되는 체중 증가 상태에서, 상기 실시예 1에서 제조한 PPB의 효과를 확인하였다.
[0214] 구체적으로, 마우스는 1주간 동물실 사육 환경에 적응시킨 뒤, 2개의 군으로 나누어 총 42일(6주)간 일반 식이를 섭취시켰다. 각 2개의 군은 일반 식이를 섭취시키면서 식염수를 경구 투여한 대조군(saline 군)과, 2.5mg/kg의 PPB를 경구 투여한 실험군(PPB 군)으로 나누어 실험을 진행하였다.
[0216] <2-2> Ob/Ob 마우스 비만 유도 실험동물에서 지방의 세포 크기 변화 측정
[0217] 상기 <2-1>에서 제작한 일반 식이 대조군과, PPB 투여 실험군의 마우스로부터 지방 조직을 채취하여, 이로부터지방 세포 크기 변화를 관찰하였다.
[0218] 구체적으로, 각각의 대조군과 실험군 마우수에서 채취한 지방 조직은 파라핀 블록으로 만들고 7 um 의 두께로절단해서 헤마톡실린(Hematoxylin) 과 에오신(Eosin)으로 염색하였다(H&E 염색). 염색된 조직은 Axio ImagerZ1 upright microscopy 시스템으로 촬영한 후, ImageJ 1.50i 소프트웨어를 사용하여 세포 크기를 측정하였고,[0219] ob/ob 마우스를 통한 비만 유도 동물 모델에서 PPB에 의한 지방의 세포 크기 변화를 도 5에 나타내었다.
[0221] 도 5를 살펴보면, 지방 세포의 크기가 커져있는 대조군(saline 군)에 비해서, 상대적으로 실험군(PPB 투여군)에서는 전체적인 지방 세포 크기가 감소한 것을 확인하였다. 오른쪽의 그래프는 지방 세포의 크기를 수치적으로나타낸 것이며, 역시 실험군의 수치가 유의하게(p<0.005) 감소한 것을 확인할 수 있었다.
[0223] <2-3> Ob/Ob 마우스 비만 유도 실험동물에서 간 조직의 지방 축적량 변화 측정
[0224] 상기 <2-1> 각각의 대조군과 일반군의 마우스로부터 간 조직을 채취하였다. 채취한 간 조직은 프로즌 블록으로만들고 10 um의 두께로 절단했다. 절단한 조직은 0.375 %(w/v)의 Oil-red-O 파우더로 염색을 하였다. 염색된 조직은 Axio Imager Z1 upright microscopy 시스템으로 촬영한 후 Image J 1.50i 소프트웨어를 사용하여 지방의축적 면적을 측정하였고,
[0225] ob/ob 마우스를 통한 비만 유도 동물 모델에서 PPB에 의한 간 조직의 지방 축적량의 변화를 도 6에 나타내었다.
[0227] 도 6을 살펴보면, Oil-red-O 염색에 의해 붉은 색으로 변한 지방 방울이 대조군(saline 군)에 비해서 실험군(PPB 군)에서 감소한 것을 확인하였다. 오른쪽의 그래프는 지방 축적량을 면적으로 나타낸 것이며, 역시 실험군의 수치가 유의하게(p<0.005) 감소한 것을 확인할 수 있었다.
[0229] 따라서, 본 발명에 따른 PPB 화합물은 항비만 효과가 있음을 알 수 있었고, 이로부터 본 발명의 PPB를 유효성분으로 함유하는 대사 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 건강기능식품 조성물로서 유용하게 사용될수 있음을 알 수 있다.
[0231] <실시예 3> PPB의 혈관내피세포 보호 효과 평가
[0232] 본 발명에서 분리 동정한 PPB의 혈관내피세포 보호 효과를 평가하기 위하여, 다음과 같이 실험하였다.
[0234] <3-1> 마우스 유래 혈관 내피세포 배양
[0235] 마우스 유래 혈관 내피세포 (SVEC4-10)는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)에 10%의 우태아 혈청(FetalBovine Serum) 과 1%의 항생제(Penicillin/streptomycin)를 첨가하여 37℃, 5% CO2 인큐베이터에 배양하였다.
충분한 세포를 얻기 위하여 100파이 플라스틱 디쉬에서 세포를 배양하였고, 디쉬의 바닥에 80% 가량 세포가 배양되면 트립신/EDTA 용액을 사용하여 부착된 세포를 떼어낸 후, 계대 배양을 실시하였다.
[0237] <3-2> 혈관 내피세포 사멸 모델의 제작 및 처리
[0238] <3-1>에서 얻은 마우스 유래 혈관 내피세포(SVEC4-10)에 0.5 mM 팔미트산을 24시간 처리하여 혈관 내피세포 사멸 모델(in vitro)을 제작하였다.
[0239] 여기에, 본 발명 PPB 농도를 각각 달리하여 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후, 생존해 있는 세포의 수를 확인하기 위하여 MTT 분석을 수행하였으며, 이를 통해 팔미트산 처리상태에서 혈관 내피세포의 생존에 PPB가 미치는효과를 분석하였고, 그 결과를 도 10에 나타내었다.
[0241] <3-3> 혈관 내피세포 사멸 모델에서 농도별 PPB처리군에 의한 세포사멸 보호 효과
도 10을 살펴보면, PPB를 처리 하지 않은 대조군과 5 mg/ml의 PPB 처리군을 [0242] 비교하였을 때, 생존해 있는 세포의수는 유의하게 차이가 없었으나, 10 mg/ml, 25 mg/ml의 PPB 처리군에서는 혈관 내피세포의 생존율이 분명하게증가하는 것을 확인할 수 있다.
[0244] 따라서, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 혈관 내피세포 보호 효과를 확인할 수 있었고, 이로부터혈관계 질환, 또는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있음을 알 수 있다.
[0246] <실시예 4> PPB의 혈행개선 효과 평가
[0247] 본 발명에서 분리 동정한 PPB의 혈행개선 효과를 평가하기 위하여, 다음과 같이 실험하였다.
[0249] <4-1> Ob/Ob 마우스 비만 유도 실험동물에서 플라스미노겐 활성인자 저해제-1형(plasminogen activator inhibitor type-1, PAI-1)의 함량 측정

[0250] 플라스미노겐 활성인자 저해제-1형 (plasminogen activator inhibitor type-1, PAI-1)은 플라스미노겐 형성을담당하는 핵심 세린 프로테아제인 조직형 플라스미노겐 활성인자(tPA) 및 유로키나제형 플라스미노겐 활성인자(uPA)의 주요한 저해제이다.
[0251] PAI-1은 혈관 구역에서 플라스미노겐 활성화를 저해함으로써 섬유소 용해를 조절하며, 섬유소 용해는 응고 단계의 활성화에 의해 형성된 섬유소를 분해하기 위한 엄격하게 조직화된 과정이다.
[0253] 혈행개선의 바이오마커인 PAI-1을 측정하기 위해 마우스로부터 혈액을 채취 후, 혈장(plasma) 내 함유된 PAI-1의 함량을 ELISA 키트로 측정하였고, 그 결과를 도 9에 나타내었다.
[0255] 도 9를 살펴보면, Ob/Ob 마우스 비만 유도 실험동물에서 식염수(saline) 주입하는 대조군과 PPB를 처리한 실험군을 대상으로 혈액내의 PAI-1의 함량을 측정한 결과, 실험군의 혈액 내 PAI-1 수치는 대조군에 비해 혈액 내PAI-1의 함량이 감소한 것을 확인할 수 있다.
[0256] 따라서, 본 발명 PPB 주입이 PAI-1의 생성을 억제할 수 있는 것을 알 수 있다.
[0258] <4-2> Ob/Ob 마우스 비만 유도 실험동물에서 혈중 세로토닌(serotonin) 측정
[0259] 혈행개선의 바이오마커인 세로토닌을 측정하기 위해 마우스로부터 혈액을 채취 후, 혈장(plasma) 내 함유된 세로토닌의 함량을 ELISA 키트로 측정하였고, 그 결과를 도 7에 나타내었다.
[0261] 도7을 살펴보면, 6주간 2.5mg/kg의 PPB를 경구 투여한 후, 비만 유도 동물 모델에서 saline을 주입하는 대조군과 PPB를 처리한 실험군을 대상으로 혈액내의 serotonin의 변화를 측정한 결과, PPB처리 군의 혈액 내
serotonin 수치는 saline 주입군에 비해 혈액 내 serotonin의 함량이 감소한 것을 확인하였다.
[0262] 따라서 PPB 주입이 saline만 주입한 군과 달리 serotonin의 생성을 억제할 수 있는 것으로 확인하였다.
[0264] <4-3> Ob/Ob 마우스 비만 유도 실험동물에서 혈중 총 아질산염 측정
[0265] 혈행개선의 바이오마커인 총 아질산염(total nitrite)을 측정하기 위해 마우스로부터 혈액을 채취 후, 혈장(plasma) 내 함유된 총 아질산염의 함량을 키트로 측정하였고, 그 결과를 도 8에 나타내었다.
[0267] 6주간 2.5 mg/kg의 PPB를 경구 투여한 후, 비만 유도 동물 모델에서 saline 주입하는 대조군과 PPB를 처리한 실험군을 대상으로 혈액 내 total nitrite의 함량을 측정한 결과, PPB처리 군의 혈액 내 total nitrite 수치는saline 주입군에 비해 혈액 내 total nitrite의 함량이 감소한 것을 확인하였다.
[0268] 따라서 PPB 주입이 saline만 주입한 군과 달리 total nitrite의 생성을 억제할 수 있는 것으로 확인하였다.
[0270] 상술된 실험예 및 본원에 참조되는 도면으로부터 알 수 있듯이, 본 발명 화학식 1로 표시되는 화합물, PPB는,혈중 피브리노겐 및 플라스미노겐 활성인자 저해제-1형의 함량을 감소시키고, 프로스타글란딘 (PGI2) 발현을 증가시키고, 세포내 부착 단백질(E-selectin, ICAM-1, VCAM-1, vWF)의 발현 및 ET-1(endothelin-1)의 발현을 감소시키는 바,
[0271] 혈전 생성 억제, 혈관 탄력성 보존 및 개선, 혈관 내장근육 비정삭적 증식 억제, 혈관내벽 내피세포 손상 억제,혈관외벽 섬유소 생성 억제, 혈압 증가 방지의 우수한 효과가 있음을 알 수 있다.
[0272] 이에, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 또는 이를 함유하는 감태 추출물, 바람직한 예로 50% 에탄올로 추출된 감태 추출물, 또는 이로부터 얻어지는 분획물, 바람직하게는 ECE 분획물, 분획물질, 또는 상기 추출물의 분말 형태를 유효성분으로 함유하는 대사 질환, 혈관계 질환, 또는 혈전성 질환의 예방, 또는 치료용 약학적 조성물, 및 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. 

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